蜘蛛侠的主要反派
绿魔：诺曼·奥斯本
诺曼变成绿魔时，彼得正处在“三角关系”中，和玛丽暧昧又无法拒绝格温。绿魔绑架了格温，蜘蛛侠前来营救却不慎拉断格温的脖子，让她丧命。
第二代绿魔：哈利·奥斯本
蜘蛛侠曾抓住哈利并交给警方。为哈利治疗的医生成为第三代绿魔，不过很快灭亡，哈利也得到治疗，并忘了彼得就是蜘蛛侠。过了段正常生活后，再次产生精神问题，配制新绿魔药剂后要和蜘蛛侠决一死战，终因药剂副作用死亡。
章鱼博士：奥托·奥克塔维斯
章鱼博士从小受尽羞辱和嘲讽，靠学习证明自己的价值，后成为科学家。认识诺曼·奥斯朋，很快成为朋友，加入奥斯朋的公司进行武器开发。章鱼爪是他为工作特制的工具。实验室爆炸将当时作为主管之一的奥克塔维斯卷入事故，再也无法摆脱章鱼爪。为成为世人景仰的科学家，他开始疯狂犯罪，窃取各种科学器材进行研究，成了一个彻底的怪物。
毒液：艾迪·布洛克
蜘蛛侠某次行动中被外星生物寄生。外星生物化成黑色战衣，令蜘蛛侠有更强力量，并影响蜘蛛侠心智，被发现剥离。“毒液”布洛克的真实身份和彼得一样，都是报社摄影记者。以拍摄蜘蛛侠动向出名，后伪造蜘蛛侠犯罪照片被解雇，他归罪于蜘蛛侠。蜘蛛侠在教堂钟楼撕掉黑蜘蛛服，碎片落到楼下观看的布洛克身上，衣服碎片与布洛克结合获得超能力，成为“毒液”，被蜘蛛侠打败并送进监狱。在监狱中共生体分裂出一个卵，后来这个卵附身到艾迪监狱中的室友，名叫克里图斯·卡萨迪的杀人狂身上，令他变成了屠杀。
蜥蜴博士：科特·康纳斯
康纳斯本作为生物学家和医学家活跃于科学界，因战争失去了一只胳膊，回国后一蹶不振，放弃原先的成就进入大学任教。一次，他由爬虫动物的再生功能得灵感，用自己擅长的基因生物学改变自己的命运。开始秘密研究提炼蜥蜴的DNA。终于发明了一种药物，并直接打入自己体内，得到新手臂，却无法控制这种药物的负作用。他的身体每到夜间就开始变异成蜥蜴疯狂破坏，并有了更多的蜥蜴习性，再也无法恢复人形。变异让他痛苦不堪，为恢复人形他抢劫科学部，多次被蜘蛛侠破坏，他把一切矛头都指向蜘蛛侠。
