Question

测定蛋白质活性的方法有哪些？ 细胞试验与动物实验的优缺点？

Answer 1

定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。考马斯亮蓝法（Bradford法）。
凯氏定氮
灵敏度低，适用于0.2~
1.0mg氮，误差为
±2％
费时
8～10小时
将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定
非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）
用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）
灵敏度低
1～20mg
中速
20~30分钟
多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物
硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸
用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法
较为灵敏
50～100mg
快速
5～10分钟
蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收
各种嘌吟和嘧啶；
Folin－酚试剂法（Lowry法）
灵敏度高
～5mg
慢速
40～60分钟
双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原
硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；
各种硫醇
耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法)
灵敏度最高
1～5mg
快速5～15分钟
考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm
强碱性缓冲液；
SDS
最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；
颜色深浅随不同蛋白质变化