pcr实验详细步骤是怎么样的？
1、模板的取材主要依据PCR的圹增对象，可以是病原体标本如病毒、也可以是病理生理标本如细胞等。
2、标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品霓要经过SDS和蛋白 酶K处理。难以破碎的细菌，可用溶菌酶加EDTA处理。
3、引物最好在模板cDNA的保守区内设计，引物长度一般在15~30碱基之间，引物长度常用的是18~27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应
4、引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃，GC含量过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度
5、引物3’端要避开密码子的第3位，引物3′端不要终止于密码子的第3位，引物3′端不能选择A，最好选择T，引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异。
扩展资料：
PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。
通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变。
能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
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2024-11-04 广告
PCR实验：
1、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
2、退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3、延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
扩展资料：
PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行。
参考资料来源：百度百科-PCR实验室
