Question

紫外分光光度法测定蛋白质含量

Answer 1

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下：

1、实验部分

仪器与试剂：Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；牛血清蛋白；超纯水。

试液的制备：牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。

2、结果与讨论

校正曲线的绘制，准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。

精密度配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线，校正曲线方程为A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

稳定性取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化。

3、结论

该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。