Question

关于质粒转化

您好，我想请教几个问题
1 电击和热击转质粒的区别，最好详细些~
2 我最近用电击的方法做了肠杆菌的质粒转化，可是没有一个菌落长出来，不知道问题出在哪里呢？
（之前用热击的方法做过大肠杆菌的转化，效率非常高，所以觉得感受态细胞的制备应该是没有问题的，这两个方法很类似，只是培养基和离心时间有区别）

谢谢，期待您的回答~

Answer 1

1.电击转化时通过瞬时高压使细胞表面出现微小的孔洞，从而使外源DNA能通过孔洞进入到细胞里面，一般适用于革兰氏阳性细菌或者真核微生物；
热激转化是使用钙盐或者镁盐溶液在低温状态下处理细胞使其处于感受态状态，然后通过短时热激使其吸入外源DNA片段，主要应用于革兰氏阴性细菌。
这些我想你应该懂的。我就不赘述了。
2.大肠杆菌作为革兰氏阴性细菌，使用一般的化学转化即热激转化就可以了，为何要劳神费力使用电转化？转化的目的不就是简单而方便为原则么？正所谓杀鸡焉用牛刀？
希望我的回答对你有帮助。

Answer 2

电击转化要注意很多问题，建议查查实验步骤以及注意事项，比如宿主菌需要养到对数期，比如连接及PCR产物与质粒的转化也不一样，前两者需要进一步纯化后再电转，质粒却不需要，但不可以加多，一般1-2微升即可。

Answer 3

果断不懂，我是打酱油的，，，