PCR产物是用胶回收试剂盒还是直接PCR产物纯化试剂盒
如果确定PCR产物很纯（没有引物二聚体），完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯，或者PCR扩增条带比较小，PCR产物前面又有较多引物二聚体时，用胶回收，其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别：
PCR纯化试剂盒：是直接水溶解的PAC产物就可以回收，回收效率高，但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒：是在PCR产物是混合物，有多条杂带的情况下，先跑胶将杂带分离，然后在将所要的条带位置的胶切下回收，后者的回收效率低，但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤：
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后，在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量，切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量，求出凝胶块的重量，近似地确定其体积。一般情况下，凝胶的密度为1g/ml，于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算：凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml；加入等倍凝胶体积的Binding Buffer，把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化，其间每隔2-3分钟混匀一次；
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子，并把柱子装在一个干净的2ml收集管内，室温下，10,000×g离心1min，弃去液体。
将柱子重新套回收集管中，加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中；室温下，10,000×g离心 1分钟，去弃滤出液；这一步相当关键，不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中，加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室温下，10,000×g离心1分钟，去弃滤出液；注：SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中，重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室温下，10,000×g离心1分钟，去弃滤出液；
弃去液体，将空柱子重新套回收集管中，10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇，不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上，加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上，10,000×g离心1分钟，离心管中的溶液就是纯化的DNA产物，保存于-20度。
GRS塑料
2024-11-04 广告
