什么叫做免疫组化的非特异性染色
在利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术中,除正常的真实的阳性信号外,常常会遇到不正常的背景着色,常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处、坏死组织及固定不良的组织中心处。
非特异性染色常见的有间质着色、全片着色、切片边缘着色、着色区灶状分布等,表现为弥漫性,均匀性的背景染色,也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。
扩展资料
组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:
(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。
(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。
(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。
(4)从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆。
(5)抗体分子上标记的荧光素分子太多,这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子,可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。
(6)荧光素不纯,标本固定不当等。
2023-04-14 广告
免疫组化的非特异性染色是一项利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术。结果一张片子染得脏脏的情况,最常见的非特异性染色。
抗体浓度过高/孵育时间过长,一抗浓度太高也是出现非特异性染色的常见原因。解决的办法就是预实验。每次使用新抗体前应该多做预实验,摸索出最理想的工作浓度。
不能简单地按照说明书来用。另一个常见原因就是孵育时间过长。解决的办法就是定时器。加上抗体后,立刻调好定时器,提醒自己及时终止反应,就会避免这个问题。
扩展资料:
一下子染太多片子的时候,容易出现这种情况。解决的办法就是不要贪多嚼不烂。一次少染几张。还有就是试剂充分覆盖组织,超出组织边缘2 mm。
然后用PAP笔在组织周围画一个圈圈,把修复液圈在里面。避免修复液流走。圈圈应该距离组织边缘3-4 mm。
参考资料来源:百度百科-非特异性酯酶染色
2017-08-24 · 专注各类elisa试剂盒、血清抗体