Question

分离土壤中分解尿素的细菌应注意哪些无菌操作？

Answer 1

1. 寻找目的菌株时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2. 实验室微生物的筛选原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

3. 分离土壤中能分解尿素的细菌应配制尿素作为唯一氮源的培养基，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

4. 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

5. 显微镜直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数，计数板上的计数室边长1mm，深度0.1mm，体积0.1mm3，通过测定一个计数室内的微生物数量，换算得到1ml菌液中的微生物数量。本计数方法的优点是直观、迅速，缺点是误差较大、不能区别活菌与死菌、不适合细菌计数（太小）。

6. 稀释涂布平板法测定微生物数量（也叫活菌计数法或间接计数法）的原理是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。本方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

7. 设置对照实验的主要目的是：排除实验组中非测试条件（实验操作、培养条件等无关变量）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

8. 同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多，在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长，因此，土壤有“微生物的天然培养基”之称。

9. 每个稀释度下需要3个选择培养基，遵循实验设计的平行重复原则，增强实验的说服力与准确性。

10. 牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目。

11. 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、