酶特性的检验原理
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酶活性测定法是利用酶能专一而高效地催化化学反应的性质,通过测定酶促反应速度来检知体液等生物样品中某种酶的含量和活性的分析技术。
酶活力的测定可采用两种方式:
其一是测定完成一定量反应所需的时间,其二是测定单位时间内的酶催化的化学反应量。
终点法
该方式是在特定条件下,将样品中要检知的酶作用一定量的底物,然后根据反应进行到某一程度(即达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶的活力。
其一个发展是采用检测器对反应进行连续跟踪,并在反应达到某一程度时,精确地自动记录所需要的时间,这就是酶分析自动化中的固定浓度法;另一个发展是作成简便的酶检测纸片。
动力学法
该方式测定原理是:在一定条件下,酶促反应速度和酶浓度成正比,因此测得反应速度就需要求得酶浓度。待测的酶浓度是影响反应速度的唯一因素,其他因素都应处于最适于酶发挥催化作用的水平,为此应选择适宜的底物浓度、缓冲体系、温度,并向反应系统中添加必要的辅助因子。
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