Question

银耳菌种怎样保藏？要注意哪些？

Answer 1

银耳菌种保藏方法有以下几种：

（1）低温传代保藏

挑选健壮的一级试管种，将棉塞齐管剪平，再用石蜡封口，以减少培养基失水，然后直接置于冰箱中1～4℃的温度下保藏。此法保藏期较短，耳友菌丝每隔3～4个月转管一次，而银耳纯白菌丝在5个月之内应使用完毕。低温斜面保藏时，一般要采用营养丰富的天然培养基。最好在培养成分上加入少许0.2%磷酸二氢钾、磷酸氢二钾做缓冲剂，以中和菌种保藏过程积累的有机酸。

（2）液体石蜡保藏

此法适用于耳友菌丝的保藏，保藏期2～4年。其方法比较简便，只在斜面菌种的试管内注入经灭菌的石蜡油，注入量以高于斜面1厘米为宜，使菌丝体与空气隔绝，降低其新陈代谢。再用无菌的橡皮塞好，石蜡封口，直立存放干燥处或冰箱中保藏。最好1年移植1次，使用时不必倒去石蜡，只要用接种针从斜面上勾取一小块菌丝即可，其余继续保藏。操作时注意：液体石蜡在火焰灭菌时易飞溅，刚从石蜡菌种中挑出移接的菌丝块沾有石蜡油，故生长微弱，必须再转接一次才能恢复正常。

液体石蜡保藏见图22。

图22 液体石蜡保藏法

1.橡皮塞 2.标签 3.液体石蜡 4.培养基

（3）滤纸保藏

此法适合银耳芽孢的保藏，保藏期限4年以上。其方法是：经孢子弹射提纯的芽孢，预先培养在斜面培养基上，菌龄不超过1个月。操作时，先将滤纸剪成40毫米×40毫米的方块，中央用红色铅笔做好记号，卷成小筒，装入试管内，棉塞封口；再经高压灭菌后，置于40℃烘箱中烘干；然后在无菌室内用接种环挑取一环芽孢，涂在滤纸记号处，放回试管内，置于硅胶干燥器内吸潮7～10天；最后放入装有5～10克硅胶的大试管中，用无菌橡皮塞塞好，用蜡封口，置低温下保藏。使用时在无菌条件下取出滤纸，用接种环沾上无菌水，在滤纸有标记处刮取银耳芽孢，移入新制的无菌斜面培养基上。在适温下培养，芽孢开始繁殖形成酵母状菌落，经镜检无杂菌，即可用于生产。

（4）真空冷冻干燥

此法是采用真空、干燥和低温3种手段来保藏菌种，保藏期长达10年之久，仍不降低其原有种性。基本方法是：将保藏的银耳芽孢悬液，装在特别的安瓿管内，然后骤然冰冻，并立即抽成真空，使培养物以固体形态升华脱水，形成完全干燥的固体菌块，在真空条件下熔封后，低温保藏。此法限于保藏银耳芽孢悬液，而对银耳菌丝体和耳友菌丝体的保藏不适合。

为保持银耳菌种优良性状，在生产中最好把经常使用的斜面低温传代、冰箱保藏法与真空冷冻干燥保藏法、液体石蜡保藏法等结合使用，以减少传代次数。原则是，原始菌种第一次传代时，可以多传一些斜面，部分用于第一次生产母种，部分留作第二次、第三次生产母种，部分用液体石蜡法或真空冷冻干燥法保藏。这样能使每批生产用的菌种都能保持或接近原始菌种的优良性状。

菌种保藏注意以下几点：

（1）适宜的保藏培养基

保藏母种应选择适宜的保藏培养基，其配方一般要求含有机氮多，含糖量不超过2%。这样既能满足菌丝生长的需要，又能防止酸性增大，以保持菌丝旺盛的活力。

（2）适宜的保藏温度

必须根据种性特性，选择适宜的保藏温度。存放菌种的场所，必须通风、干燥，并要求遮荫，避免强光直射。存放于电冰箱中保藏的菌种，箱内温度不应过高或过低。温度过低，斜面培养基会结冰脱水，菌种容易衰老或死亡；过高，则达不到保藏之目的。

（3）封好菌种试管口

菌种的试管口用塑料薄膜包扎，或用石蜡封存，防止培养基因干涸或棉塞受潮而引起杂菌污染。

（4）使用前应活化

保藏的银耳菌种在使用前，需先置于23～26℃适温下让其活化，然后转管，更新选育。