Question

PCR扩增的反应条件

Answer 1

PCR扩增的反应条件：

10×扩增缓冲液 10ul；4种dNTP混合物 各200umol/L；引物 各10～100pmol；模板DNA 0.1～2ug；Taq DNA聚合酶 2.5u；Mg2+ 1.5mmol/L；加双或三蒸水至 100ul。

PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加。

扩展资料：

PCR扩增优点：

一、高灵敏度

PCR产物的产量呈指数级增长，pick（pg=10^-12g）的初始模板可以放大到微克（ug=10-6g）。在100万个细胞中可检测到1个靶细胞；在病毒检测中，PCR的灵敏度可达到3个RFU（斑块形成单位）；在细菌学中，最低检测率为3个细菌。

2、简单快捷

采用耐高温的TAQ DNA聚合酶进行PCR反应。将反应液一次加入，在DNA扩增液和水浴上进行变性退火延伸反应。一般来说，扩增反应在2-4小时内完成。扩增产物一般采用电泳分析，不一定用同位素分析，无放射性污染，易于推广。

三、样品的低纯度要求

DNA粗产物和总RNA可用作扩增模板，无需分离病毒或细菌和培养细胞。从血液、体液、咳嗽液、头发、细胞和活组织等临床样本中直接检测到。

参考资料来源：百度百科—PCR扩增