如何提取DNA粗提和精提的方法
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一、DNA提取（粗提取）
1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）
5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
二、DNA的浓缩（精提取）
1、固体聚乙二醇（PEG）浓缩：用透析袋外敷PEG至合适量。
2、丁醇抽提浓缩：DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。
3、乙醇或异丙醇沉淀：（1）需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前。（2）沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。
4、精胺沉淀法：与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀，需在无盐或低盐溶液。
1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）
5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
二、DNA的浓缩（精提取）
1、固体聚乙二醇（PEG）浓缩：用透析袋外敷PEG至合适量。
2、丁醇抽提浓缩：DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。
3、乙醇或异丙醇沉淀：（1）需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前。（2）沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。
4、精胺沉淀法：与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀，需在无盐或低盐溶液。
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研载生物科技（上海）有限公司_
2023-05-31 广告
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