Question

我的引物退火温度怎么算

Answer 1

计算退火温度的方法：
1.
退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）
只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or
oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2
or
3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。
我认为方法二最准确，

Answer 2

公式，只是个经验公式，不准。
再说引物的真实退火温度跟溶液体系中的离子强度、ph等都有关，所以不是一个绝对不变的值。
公司的退火温度应该是根据他在合成过程中的体系条件给出的。
真正的适用温度还需要你在实验中优化确定。前2者只是参考。