Question

请写出比较小麦萌发前后淀粉酶活力的实验方法

Answer 1

操作步骤

1．淀粉酶液的制备称取1g 25℃下萌发3天的小麦种子（芽长约1-1.5cm），置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水，研磨成匀浆后，将匀浆转入离心管中，用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔2分钟搅动1次，使其充分提取。然后在3 000r/min转速下离心10min，将上清液倒入50mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液，用于淀粉酶活力的测定。吸取上述淀粉酶原液10mL，放入50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于淀粉酶总活力的测定。取干燥种子或浸泡2.5小时后的小麦种子1g，进行淀粉酶的提取，提取方法同上。

2.麦芽糖标准曲线制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表1加入试剂。

附 注

（1）样品提取液的定容体积和酶液稀释倍数可根据不同材料酶活性的大小而定。

（2）为了确保酶促反应时间的准确性，在进行保温这一步骤时，可以将各试管每隔一定时间依次放入恒温水浴，准确记录时间，到达5min时取出试管，立即加入3,5-二硝基水杨酸以终止酶反应，以便尽量减小因各试管保温时间不同而引起的误差。同时恒温水浴温度变化应不超过±0.5℃。

（3）如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，例如萌发1d、2d、3d、4d的小麦种子，比较测定结果，以了解萌发过程中这两种淀粉酶活性的变化。