Question

标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么？

未导入目的基因之前，质粒上已经有标记基因，那无论是否导入目的基因，用选择培养基筛选不是都有抗性吗，那还怎么区分重组质粒与普通质粒？

Answer 1

质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便。而且两个标记基因的功能是不一样的。比如我们最常用的PUC18/19等，一个是氨苄抗性，另一个是LAC Z基因。
前一个基因的存在，让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着，如果不加氨苄，细菌肯定会把这个质粒丢掉的（毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱，但当氨苄存在时，如果细菌把质粒丢了，细菌便不能抗氨苄而被杀死）。
而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的。LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下，而产生兰斑。而且这个基因上有很多的酶切位点，方便我们插入自己想要的基因。而我们的基因插入后，把LAC Z基因破坏了，不能产生兰斑。这就是兰白斑筛选。

Answer 2

区分重组质粒与普通质粒的方法有很多，比如利用α-互补原理进行蓝白斑筛选，利用插入失活原理进行双抗筛选，以及针对插入目的片段功能的底物筛选等。对于一般的质粒载体，则可随机挑取单菌落，采取菌落PCR、southern blot、质粒抽提及酶切等方法来判断是否重组质粒。

Answer 3

跟你简单的说吧
首先质粒是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质，真核细胞是没有质粒的，目的基因先与质粒连接，经过一定的方法鉴定，一般是酶切、电泳，看目的基因是否与质粒连接上，将连接成功的重组质粒导入受体细胞，这里的受体细胞一般是真核细胞，如果带标记基因的重组质粒导入细胞了就可以用选择培养基筛选了。

Answer 4

检测标记基因，就是看一看质粒是不是已经转入了，在此基础上还要进行目的基因的检测，mRNA的检测和表达产物的检测，分别利用DNA分子杂交，DNA-RNA分子杂交，以及抗原抗体杂交

Answer 5

在插入位点两边设计引物PCR，看电泳条带大小，或者直接测序看是不是目标序列
或者双酶切，再电泳看看导入进去了没，质粒上应该有酶切位点的吧