Question

枯草芽孢杆菌的培养为什么要加热除去营养细胞

Answer 1

枯草芽孢杆菌的培养为什么要加热除去营养细胞
枯草芽孢杆菌常用培养基配方：
1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1
培养枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2
新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14
h，各取1
mL
菌液转接入装有20
mL
液体完全培养基的250
mL
锥形瓶中，36℃振荡培养
3
h，使细胞生长进入对数前期，各加入25
u/mL
青霉素，使其终浓度为0.3
u/mL，继续振荡培养2
h。
2.
收集细胞
各取菌液10
mL，4000
r/min
离心10
min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10
mL
SMM
中，每mL
约含108～109
活菌为宜。
3.
总菌数测定
各取菌液0.5
mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7
各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24
h
后计数。此为未经酶处理的总菌数。
4.
脱壁
二株亲本菌株各取5
mL
菌悬液，加入5
mL
溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100
ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30
min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000
r/min
离心10
min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5
mL
高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。
5.
剩余菌数测定
取0.5
mL
上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4
稀释液各0.1
mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48
h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。
计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。