Question

高中生物选修三

既然有了标记基因对目的基因的存在进行检测 那为什么还要通过DNA分子杂交技术检测检查阿？ 还有什么是DNA分子杂交技术啊 书本上说的是探针 杂交带什么的 有没有对于此问题简单点的说法或者解释一下 看不懂书上说的

Answer 1

首先要明白，这里的标记基因针对的是基因工程操作，如果需要克隆一个基因，需要把这个基因重组到载体中去，进一步把重组载体送到受体细胞中。
但是这个基因不一定是纯的，可能和其他的DNA片段混合在一起，发生重组的载体就可能有两类，一类是重组了目的基因的，一类是重组了非目的基因的。当然还有未发生重组的空载体。
进而发生转化（载体进入受体细胞）是可能有三种情况：一是未重组的载体进入受体细胞；二是重组目的基因的载体进入受体细胞；三是重组非目的基因的载体进入受体细胞。
那么就有两个问题要解决：一是如何判断重组载体进入受体细胞了；二是如何判断重组有目的DNA的载体进入受体细胞。
标记基因因为存在于载体上，可以作为受体细胞接受外来载体的标志（不论是何种载体）；如果重组载体与DNA重组的位置在另一标记基因内部，则可能导致该标记基因失活。那么两个遗传标记都存在的就是空载体发生转化，只有一个遗传标记的是重组载体发生转化。
但是如何判断重组有目的DNA的载体进入受体细胞？
可以采用分子杂交的方法，实质就是用目的基因的序列（探针）去跟未知的受体细胞中的DNA杂交，如果能够杂交，说明该受体细胞中含有和探针序列相同的DNA（就是重组有目的基因的载体）。而这种杂交一般发生在固体支持介质上（比如琼脂糖凝胶或者硝酸纤维膜等），杂交信号表现的是一个条带，称之为杂交带。
总结起来就是遗传标记能筛选出接受重组载体的受体细胞；DNA分子杂交技术检测接受重组有目的基因载体的受体细胞。

追问

书上还说 标记基因的作用还有一项是将含有目的基因的细胞筛选出来 那是不是意味着将目的基因成功进入了的受体细胞进一步进行培育得到转基因生物 而单纯的进入受体细胞的目的基因也不能保证每一个都能表达性状 从而要通过DNA分子杂交技术来进行检验？

追答

前提是能够确定用于重组的是纯的基因，这时只要有标记基因就意味着重组载体进入细胞中了，可以直接认定目的基因进入受体细胞，这种细胞就含有目标基因了。如果不能保证用于重组的DNA是纯的，就必须以分子杂交的方式确认接受目的基因的细胞（所谓的期望重组子）。
但是目的基因进入受体细胞未必就会发生表达，而且基因工程操作的目的不同，对目的基因是否表达的要求也不同。比如单纯的克隆目的基因，就不需要表达；如果是进行生物转基因改造，或者生产某种转基因产品（比如激素之类的），就需要进行表达了。
对于是否表达的判断有很多方法，分子杂交也是可以的，但是检测的对象不是目的基因而是目的基因转录形成的mRNA；也可以用免疫学方法检测，或者表达产物功能检测，或者目的基因本身就能产生某些可见的形状（这种情况就不用像前面的遗传标记、分子杂交那么复杂，直接判别就可以了）。

Answer 2

DNA分子杂交技术 等同于 DNA探针技术
DNA分子杂交技术： 1 。探针是针对特定DNA序列（如病原微生物的DNA序列）而设计的 2。DNA分子杂交前要解旋 3.之后根据碱基互补配对原则 探针单链和待测单链 用氢键结合 4 探针（探针DNA单链）上带有放射性标记元素 5 检测放射性
（杂交后是要“洗脱”（经过处理）的，只有这种特异性的杂交才被保留下来，再通过检测探针上的标记来看出是否杂交上。） 只有 特异性结合 探针单链 的DNA中可以检测放射性

Answer 3

构建基因表达载体的时候要同时有目的基因和标记基因，这样就好像给含有目的基因的细胞标记上了一样，但是也会存在目的基因没有成功导入的情况，所以我们用DNA分子杂交的方法用来准确的检测是否成功导入，DNA 分子杂交技术简单地说就是取能与要检测的目的基因碱基互补配对的一小段单链DNA，把它标记上，再把要检测的DNA处理成单链，要是能互补配对就产生了杂交带，说明导入成功了，要是不能互补配对就不能产生杂交带，就没有导入成功

Answer 4

标记基因只能用来说明目的基因是否有导入到受体细胞中，但是他不能说明，目的基因是否表达，只有通过DNA分子杂交

追问

书在介绍dna分子杂交技术的时候 书上的描述是：（将转基因生物的基因组dna提取出来，在含有目的基因的DNA片段上标记， 以此作为探针 ，使探针与基因组dna杂交 。）请问 这里面第二句话中的含有目的基因的DNA片段不矛盾吗 既然是要检测目的基因 为何又要直接它本身拿目的基因出来检测 这不是没有意义了吗 我的理解出现了错误 可是发现不了是哪里）

追答

"为何又要直接它本身拿目的"这句话什么意思