Question

如何收集用于western blot等的细胞

我现在在养细胞，然后收细胞抽蛋白以及提RNA用，我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞，有具体的流程吗？我是这样做的：1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心2、倒去上清，加1 mlPBS打匀后转移至1.5 ml EP管3、离心12000 rpm 2 min （不知道大家这里用多少转速，有讲究吗？）4、倒去上清，我是将EP管倒置一会，但是EP管里面还是有一些上清，我没有倒干净，请问是不是要倒干净上清啊？因为我暂时还不抽提，离心后EP管 是放到-80度冰箱保存的。这个上清对抽蛋白和RNA有影响吗？

Answer 1

博凌科为解答：1、1 ml的PBS可能溶不了那么多细胞（如果你细胞多的话），所以建议用3 mlPBS，分两管装，离完心后用Trizol溶解合成一管2、离心的速度太大了，细胞会死的，建议800 转，5 分钟，一般的细胞都可以离下来3、需要去上清，如果是提RNA就用Trizol溶解合成一管，然后放在－80度冰箱，如果提蛋白就直接将离心后的细胞放在－80度冰箱。上清对于 提蛋白和RNA没什么影响。还有一点，提RNA的东西一定要高压，如果是初次做可以用DEPC水泡枪头，可以提高作成功的几率。如果操作严格，可以只把要 用的枪头和EP管高压即可。其他的没什么特别的，流程跟你写的是一样的。

Answer 2

目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提，是用特殊的细胞你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。