Question

请教quantitative real-time PCR技术的具体操作步骤和注意事项

请高人指教：quantitative real-time PCR技术的具体操作步骤和注意事项？万分感谢！

Answer 1

博凌科为生物科技-为你解答：注意事项：加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均。移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性。多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了。所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因。防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22m滤膜过滤除菌。5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。