Question

革兰氏染色的关键步骤是什么

Answer 1

酒精脱色为整个流程最关键的一步。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

（1）载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。

（2）草酸铵结晶紫染1分钟。

（3）自来水冲洗，去掉浮色。

（4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。

（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。

（6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。

扩展资料

染色原理：

该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低。

故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。

G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。

参考资料来源：百度百科-革兰氏染色法

Answer 2

革兰氏染色四大基本步骤：
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
沙黄复染
其中乙醇脱色是关键
因为如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性
如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性

Answer 3

实验方法
步骤
　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方

法是： 　　1）涂片固定。 　　2）草酸铵结晶紫染1分钟。 　　3）自来水冲

洗。 　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 　　5）水洗，用吸水纸吸去水分。

　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。 　　

7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。

G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱

水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙

醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。

Answer 4

结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色、番红复染四步都很重要，关键是控制好每一步骤的时间，分分半半。

Answer 5