Question

在做PCR时，出现引物二聚体

做PCR的时候 用的水作对照，不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体，而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里呢?求大神解答

Answer 1

一.引物设计和样品使用均是一样的情况，就是反应条件的问题
二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器，操作都一样的话，仪器设定上出问题的可能性会大一些，其中退货温度是比较关键的
三.人品问题也会导致这样的情况
四.一般减少引物二聚体的方法：

1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；

2. 可能模板有问题；

3. 模板浓度过小，适当加大模板量；

4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；

5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；

6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；

7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；

8. 增加循环数；

9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；

10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对；

11. 以上次的PCR产物作模板二次PCR，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍。

Answer 2

别的组的同学用的引物跟你的引物是一样的吗？如果一样的话，那就要考虑您的模板质量的问题了。如果扩增不成功，电泳图的底部都会有引物的条带。

Answer 3

那看你是做什么实验了，基本上出现引物二聚体没什么问题的，不影响实验结果的