如何用SDS法提取植物DNA?SDS.提取液如何配置?~~~大神们快来帮帮小学渣…
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药品试剂及耗材:
—— 液氮
—— 提取缓 冲液:500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8,10 mmol/L 2-巯基乙醇(用前加入)
---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc
---- 氯仿:异戊醇(24:1) —— 异丙醇 —— 70%乙醇
—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0
—— 液氮
—— 提取缓 冲液:500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8,10 mmol/L 2-巯基乙醇(用前加入)
---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc
---- 氯仿:异戊醇(24:1) —— 异丙醇 —— 70%乙醇
—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0
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追问
那提取的方法呢?
追答
1. 将1 g植物材料于液氮速冻,然后在研钵中将其磨碎,将粉末转至2 ml离心管中。
2. 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液(3V),轻缓振荡混匀,加入120μl 20%SDS(达到终浓度 2%),混匀,置65℃水浴中放置30分钟,不时颠倒混匀。
3. 加入0.45 ml 5M的醋酸钾(1/10V),混匀,冰浴20分钟,在10000 rpm离心20 min。需要的话,Miracloth纱布过滤除去沉淀,取上清液转入另一离心管中。
4. 加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),轻轻颠倒混匀, 12000 rpm离心15 min。
5.转移上清液到另一新离心管中,加入0.7V冰预冷异丙醇,轻轻颠倒混匀,(见丝状沉淀)-20℃放置30分钟沉淀核酸。
6. 25℃,12000 rpm,离心10 min,收集沉淀。
7. 弃上清,70%乙醇洗两次。
8. 凉干DNA,溶于50 µl ddH2O(或TE biffer),4℃保存备用。
研载生物科技(上海)有限公司_
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