Question

比色法操作的注意事项是什么?

Answer 1

 噻唑蓝（MTT）比色法操作注意事项

 噻唑蓝（MTT）：四唑盐

1. 原理：

   MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法.活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与活细胞数成正比。

2. 优点：简单快速、灵敏、经济

3. 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

4. 应用：新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等

5. MTT主要有两个用途

   1）药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；

   2） 细胞增殖及细胞活性测定。

6. 比色法操作注意事项

   1） 选择适当的细胞接种浓度，保证细胞培养结束时浓度不至于过满。

   2） 种板技术：均匀。

   3） 实验时应设置调零孔，溶媒孔，加药孔。

   调零孔：培养基、MTT、DMSO。（无细胞）

   溶媒孔：培养液、MTT、DMSO、细胞、溶酶。

   加药孔：培养液、MTT、DMSO、细胞、不同浓度的药物。

   （一般5-7个梯度，设3-5个复孔）

   4）避免血清干扰：一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。

   5）边缘效应：周边孔加入PBS。

   6）MTT的配置： MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液。4℃下避光保存2周。

   7）孔板的重复利用（1.做完MTT后用大水流尽量将板冲净，然后用洗衣粉水泡几个小时（小心最好让洗衣粉先化开）。2.用自来水冲净洗衣粉水，倒扣晾
   干.3.重铬酸钾加浓硫酸配成的酸液中浸泡过夜泡洗液（六小时以上即可）后自来水洗净（20次左右）每个孔都要处理4.用去离子水冲洗3遍，双蒸水冲洗3
   遍，烤干5.超净台中紫外线照射2个小时左右，就可以用了，不可以高压。或泡酸过夜，dd水冲洗干净，烘干或者晾干后紫外照射30min以上即可使用。

   8）MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。

   9）在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

   10）MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套。

   11）配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以操作台上的照明灯关掉。

 

Answer 2

1选择合适的熔样方法，制备合适的试样溶液
(1)氢氧化钠为熔剂，盐酸分解；
(2)碳酸钠烧结，盐酸分解或碳酸钠烧结，氯化铵重
量法测定纯SiO。时的滤液，以及纯SiO。残渣经焦硫酸
钾熔融后分解溶液，二者合并；
(3)碳酸钠一硼砂为混合熔剂，稀硝酸和稀硫酸溶解
后之滤液，或者稀硝酸溶解液，或浓盐酸分解。
2显色反应
(1)掩蔽剂与显色剂应有正确的配制和保存方法，否则影响吸光度。
(2)显色温度与时间。显色反应有一定的温度和时间
要求，如高碘酸钾氧化比色法分析MnO，应微沸10～
15min使显色完全，并冷却至室温下比色。二安替比林
甲烷比色法分析TiO。，由于显色反应较慢，显色时间则
需较长时间(40min以上)。
(3)比色。比色仪器分光光度计应定期检定，应选择
正确的波长，合适光程的比色皿。色皿应保持干净，受污
染的比色皿可用稀硝酸浸洗，用镜头纸擦拭表面，比色
皿内液体不能有气泡或悬浮物。通常情况下，比色测定
在室温进行。

Answer 3

比色法在无机材料分析中的应用及注意事项:
1比色法的应用比色法是利用溶液颜色的深浅来确定待测物质含量的一种方法.在无机材料低含量成分分析中,与常用的滴定法、重量法比较,比色法具有较高的准确度和灵敏度.例如,TiO2滴定法,存在操作麻烦、终点颜色难以辨认的缺点.矾土、普通矿渣、铁矿石中的TiO2、MnO,粘土、水泥中的TiO2,石灰石中的SiO2、Al2O3、Fe2O3,硅砂中的Fe2O3等等,这些成份含量低,一般在5%以下,若采用滴定法分析,0.05ml的滴定量就造成较大的误差,甚至未能检测出结果.特别是硅质玻璃原料硅砂中的Fe2O3,微量Fe2O3直接影响其产品质量的评级,因此不能采用滴定法,而应采用比色法进行分析(见JC/T753-2001硅质玻璃原料化学分析方法).比色法是无机材料化学成分分析的常用方法之一,TiO2、MnO、Al2O3、Fe2O3、SiO2等低含量成份,采用比色法可获得较高的准确度,从而能更好地指导生产.