Question

碱性磷酸酶的提取酶活性单位怎么计算

Answer 1

.连续监测法中酶活性浓度的计算

在酶反应过程中，用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变，通过计算求出酶反应初速度的方法。

连续监测法优点之一是计算方便，不需作标准曲线或标准管，用分光光度计监测酶反应过程时，很容易求出反应体系中每分钟吸光度变化，根据摩尔吸光系数可求出△A（相当测定物质变化的微摩尔数）。

计算中要考虑标本的稀释倍数，还应考虑光径不同时对△A的影响。

图片1

ε为微摩尔（线性）吸光体系

△A为吸光度变化

ν为标本体积（ml）

V为反应体系体积（ml）

L为光径（cm）

后面几项皆为常数，叫做酶活力浓度测定转化因子：

图片2

2.常数K值设置

在测酶时，常数K值的选择是很重要的。

比值过高虽然测定的线性范围较宽，但重复性差。反之，虽然精密度好，但线性窄。

K值设置的首发点应是测定酶的判断值或参考值上限，应保证这些值测定的可靠。

3.临床酶催化活性浓度测定的校准

由于临床酶催化活性浓度测定受测定方法和条件的影响，国际医学检验量值溯源委员会推荐了常用酶测定的参考方法。采用与仪器和试剂相配套的有溯源校准的校正测定系统，是发展趋势

Answer 2

碱性磷酸酶的提取及其比活性测定 碱性磷酸酶 (ALP , AKP) Alkaline phosphatase 一、实验目的 1、 掌握以有机溶剂分离技术提取蛋白质及酶的原理和方法； 2、掌握酶蛋白纯化过程中的活性、比活性、得率及纯化倍数的概念及计算； 3、了解AKP的临床意义及纯化蛋白质的一般方法。 二、实验原理 1、 AKP概述 ① 催化有机单磷酸酯水解，并有转移磷酸基的作用 ②最适pH：8.6～10.3 ③ 特点：特异性低 ④体内位置：细胞膜表面 -肾小管的筛状缘 -肠粘膜的微绒毛 -胆小管的细胞膜缘 -肝窦状腺表面 -胎盘合体细胞滋养层细胞外表面 ⑤正常血清： ALP主要来自肝（或胆管）和骨骼，约各占总活性的一半。 ⑥临床意义：血清ALP活力增高常见于 -肝胆疾病（胆道阻塞等） -骨骼疾病（佝偻病等） -甲状腺功能亢进 -妊娠和生长期儿童 2、AKP的分离、提取、及纯化 ① 取材 取酶含量丰富、容易提取、新鲜的组织 ② 生物组织与细胞的破碎 机械破碎法 ：高速组织捣碎机、匀浆器、研钵 渗透破碎法 ：低渗条件使细胞溶胀而破碎 反复冻融法 ： 超声波法：超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎 酶法 ：如用溶菌酶破坏微生物细胞 ③ 选择合适分离提取方法 有机溶剂方法—— 有机溶剂分段沉淀法 原理： 利用不同的蛋白质在不同浓度的有机溶剂中有不同的溶解度而进行分离。 有机溶剂： ① 正丁醇 能去除与pro结合的脂类物质，使pro溶解在溶液中 ② 乙醇 30% AKP 溶解状态 60% AKP 沉淀状态 ③ 丙酮 33% AKP 溶解状态 50% AKP 沉淀状态 ④ 保护酶活性措施 低温条件下操作 所有试管均需洗干净 选择合适的pH及合适的缓冲体系，以稳定酶活性 三、操作步骤 2g新鲜兔肝剪碎→匀浆管 加 0.01M Mg(Ac)2- 0.01 M NaAc 混合液2

Answer 3

碱性磷酸酶是广泛存在于人体肝脏、骨骼、肾脏和胎盘等组织中，通过肝脏向外表达的一种酶。血清中大部分的碱性磷酸酶主要来源于骨骼和肝脏，因此常作为检查肝脏疾病的指标之一。
碱性磷酸酶可用于检测阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、肝内胆汁淤积、病毒性肝炎、酒精性肝硬化、纤维性骨炎、骨肉瘤、佝偻病、骨软化症、骨转移癌、呆小症、维生素C缺乏症等。还可对妊娠后期和儿童生长期骨骼代谢情况进行评估。
正常值
磷酸对硝基苯酚速率法（37℃）：男性：1-12岁＜500U/L，12-15岁＜750U/L，＞25岁40-150U/L
磷酸对硝基苯酚速率法（37℃）：女性：1-12岁＜500U/L，＞15岁40-150U/L
临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。
1.生理性增高
儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。
2.病理性升高
（1）骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；
（2）肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等；
（3）其他疾病如甲状旁腺机能亢进。