Question

任何PCR引物都需要加保护碱基嘛？

Answer 1

这个一般是构建载体的时候，在引物里面引物酶切位点才会加保护碱基的，这个保护碱基是为了让酶能够正确识别酶切位点，如果你先把PCR连到T载体上再酶切的话，就不用加任何保护碱基都能正确切下来。

Answer 2

保护碱基是为了“保护酶切位点”，所以，只有引物5‘端有酶切位点时，而且想直接酶切PCR产物时，才加保护碱基。

Answer 3

不是的。
只有在你设计引物时在5‘端引入限制性内切酶位点的时候，才需要在位点前加保护性碱基。