Question

博凌科为 SYBR Green具有什么样的特点 ？具体操作方法是怎样的？

Answer 1

　　博凌科为 SYBR Green
　　SYBR Green I核酸染料(电泳用)
　　SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。
　　SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
　　SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。

　　SYBR Green I 核酸染料特点
　　◆ 高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
　　◆ 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
　　◆ 操作简单：无须脱色或冲洗。
　　◆ 适用范围广：可适用于多种电泳分析。
　　◆ 使用方便：不影响其它修饰酶作用。
　　◆ 经济：价格比银染便宜。

　　电泳用SYBR Green I 使用方法
　　SYBR Green I预染方法
　　◆ 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
　　◆ 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
　　◆ 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
　　◆ 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
　　◆ DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
　　◆ 上样、电泳：按常规操作。

　　SYBR Green I后染方法
　　◆ 按照常规方法进行电泳。
　　◆ 用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。
　　◆ 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
　　◆ 用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。

　　SYBR Green I使用注意事项
　　◆ 在”SYBR GreenⅠ预染色方法”中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。
　　◆ 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
　　◆ 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3% 的SDS。
　　◆ 在紫外照射透视下，与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
　　◆ SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

　　SYBR Green I荧光定量PCR
　　SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800-1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。