Question

为什么我做Western，电泳时预染Marker很值条带也很清晰，但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪，非常歪。

为什么我做Western，电泳时预染Marker很值条带也很清晰，但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪，非常歪。并且条带特别的不清晰，根本看不出条带！求教~~

Answer 1

你好！
我也做western有一段时间了
很高兴和你探讨下这个问题
我觉得该现象很可能的原因是转膜过程中出问题了，
即
1、转膜后的mark非常歪的原因是胶、膜以及滤纸（三明治组合）之间气泡没赶干净导致的。
2、而条带特别不清晰就得看你的转膜时间了：
转膜时间不够会导致胶上的蛋白包括mark没有完全转到膜上，
转膜时间长了会导致胶上的蛋白包括mark已经穿过膜到滤纸上了。
建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题出在哪。