Question

为什么目的基因不能直接插入载体？

Answer 1

不行，
是这样的：
基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid），即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？其实不然，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。
（1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。
（2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。
（3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。
（4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。
（5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。

Answer 2

插？怎么插？
运载体多为质粒，是很稳定且牢固的环状DNA。
DNA分子就像梯子，梯子的扶手由磷酸二酯键构成，非常牢固，要限制性内切酶才能切开。
切开后质粒会出现两个粘性末端，所以必须用相同的内切酶切下目的基因，这样目的基因和
粘性末端才能接合。

Answer 3

要先用限制内切酶处理目的基因和载体，使它们露出相同的粘性末端（基本上都是粘性末端，平末端较少），这样才能使目的基因和载体两者的末端很好的拼合在一起。否则接不上。