Question

胡萝卜组织培养实验

胡萝卜组织培养怎么样取材呢？（取材的部位）营养配方？

Answer 1

取材部位应在胡萝卜去皮之后的边缘，胡萝卜中间的木质部和髓质部相对来说分化程度更高，因而胡萝卜的皮质部更适合用来做这个实验。胡萝卜组培的营养配方一般采用MS培养基，下面是配制分装及灭菌：
按表用量筒移取大量元素母液100ml，用专一对应的移液管分别吸取微量元素母液10mi、铁盐母液10ml、有机物母液（维生素）10ml，均置人1000ml定容瓶中，若不加任何激素，则为MSo培养基；若需加激素按配方移取激素母液即可。
将已装母液的定容瓶用蒸馏水或自来水定容到1000ml，取1／3左右倒人小铝锅中加热。同时，称好30g蔗糖，称琼脂丝7g(或琼脂粉)，也倾人小铝锅中，边加热边搅拌，防止
糊底。旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化即清澈见底为度。(若用琼脂粉，应加入100ml左右的液体培养基，并搅拌均匀)。然后再倾入定容瓶内余下的液体培养基，摇晃均匀即可。
培养基配好后，要调整pH值。用0.1M的NaOH或HCl液调PH6.4—6.5。在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以将连续三次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。调后注意一定要摇动均匀，还要注意酸或碱液不要放置时间太久。
培养基合成后要趁热分装，100ml的容器约装入30～40ml培养基，即1L培养基约装35瓶左右。太多则浪费培养基，太少不易接种和影响生长。但要根据培养对象来决定。如果培养时间较长时，应适当多装培养基，生根等短期培养时，可适当少加培养基。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。
培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放人锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。

如果有什么不好的地方，请多指教。

Answer 2

胡萝卜组织培养实验的目的是了解并掌握植物组织培养的原理、方法和应用，将胡萝卜根培养成愈伤组织，并实现对有丝分裂和细胞分化知识的综合运用。
实验原理：
1. 外植体：离体的植物器官、组织或细胞。
2. 脱分化：愈伤组织幼根和芽。
3. 愈伤组织：经过脱分化形成的细胞团。
4. 再分化：愈伤组织转接到分化培养基上培养诱导出试管苗。
5. 胚状体或丛芽或丛根：试管苗发育而来。
6. 生长发育：将试管苗移栽到大田，培养成正常植株。
实验步骤：
1. 实验前准备：配置诱导胡萝卜愈伤组织的培养基，灭菌后放置在黑暗中3～5天观察是否有微生物污染。
2. 取材：消毒后选取胡萝卜根的形成层部位，切取1cm3左右的小块，因为该部位容易诱导形成愈伤组织。
3. 接种：将组织块接种到诱导培养基上，诱导出愈伤组织。
4. 培养：在23～26℃恒温避光条件下培养一段时间，再将愈伤组织转接到分化培养基上培养诱导出试管苗。
5. 移栽：将试管苗移栽到大田，培养成正常植株。
探讨问题：
1. 在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？避免杂菌在上面迅速生长消耗营养，且有些杂菌会危害培养物的生长。
2. 为什么切取胡萝卜根的形成层？其他部分也能培养成小植株吗？胡萝卜根的形成层容易诱导形成愈伤组织，其他部分如叶、花也能培养成小植株，只是稍微困难些。 另外，用不同植物或同一植物不同部位的组织细胞，诱导出愈伤组织所需的条件不一定相同。

Answer 3

1、实验课题：胡萝卜的组织培养
2、课时数：5课时
3、实验材料用具：楼上说过了
一样
4、实验前的准备工作：配制两种培养基，对滤纸、解剖刀、烧杯、锥形瓶、培养基进行灭菌消毒
5、实验过程：
第一课时：①分析实验原理植物细胞的全能性，提问概念，分析讨论，激起学生的好奇心---一个细胞真的可以长成一个植物体吗？
②设计实验，实验步骤可参看人教版选修三第34、35叶
③学生动手操作，操作过程中，老师强调注意事项：植物组织培养的成败，关键是严格的无菌操作，如手的消毒、外植体的消毒、操作器具及培养基的消毒，并让学生思考为什么要控制严格的无菌条件？再让学生分析两种培养基的区别及培养条件的控制----脱分化的条件是，23—26度恒温避光，4天观察污染情况，14天观察愈伤组织的生长情况；再分化的条件是，分化培养基、有光等，然后学生做实验，在做实验的过程中，提高实验操作能力，体验相互合作意识。
第二、三、四、五课时：统计和分析实验结果，交流评价实验结果，分析实验操作过程，在此过程中，学生体验到成功的喜悦----“原来植物细胞真的长出了植物体，我通过实验实现了这种神奇的过程”，然后可以告诉学生，这些技术已经广泛应用到生产的各个领域，以拓展学生的知识领域。例如我们吃的香蕉的幼苗就是通过这种技术获得的，这样的香蕉植物与原来的香蕉相比，没有病毒，利于香蕉的生产。

Answer 4

取材过程
1.将胡萝卜根用自来水充分洗净，削去外皮，并切成段（约10cm）。用酒精棉球擦手消毒。
2.在超净工作台（或接种箱）上将胡萝卜段用酒精溶液消毒30min后，立即用无菌水清洗2-3次，再用次氯酸钠溶液处理30min后，立即用无菌水清洗2-3次。
3.用无菌的滤纸吸去胡萝卜段表面的水分。然后，在消毒瓷瓦上，用无菌的解剖刀将胡萝卜段切成1立方厘米厚的横切片，再选取有【形成层】（取材的部位）的部位，切取1立方厘米左右的小块。
营养配方
无机营养成分，有机营养成分，激素，琼脂四部分。