PCR复制n次,至少需要加入多少引物?
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10uM浓度的引物,加个1ul足矣。在PCR反应中,经过n次循环,理论上DNA链的数目扩增了2的n次方。PCR的一个循环,一个DNA模板被复制为2个DNA片段。
PCR循环次数通常就是30左右。循环数太多了,虽然在一定程度上能够提高产物量,但是由于反应时间过长。
有一些非特异产物的扩增也会相应增加;而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特异性扩增。
扩展资料:
PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。
引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。
模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制。
参考资料来源:百度百科-聚合酶链式反应
研载生物科技(上海)有限公司_
2023-04-12 广告
2023-04-12 广告
PCR就是聚合酶链式扩增反应,因为DNA是双链,扩增时就需要同时扩增两条链,需要设计上游和下游引物,同时扩增DNA双链因为引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补; 另一个引物与靶区域另一端的另一条D...
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10pmol的浓度的引物,通常我们都加入1ul,事实上这个浓度是超量的,所以通常不需要考虑其他量。
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2的n-1次方
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看文献 看看别人怎么弄得
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10uM浓度的引物,加个1ul足矣
可根据你自身实验情况调节
可根据你自身实验情况调节
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