Question

谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用

Answer 1

这个用于Syber Green实时PCR。而使用探针的不需要。

因为Syber Green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的Tm。PCR反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。PCR产物会在温度达到TM时发生解离，荧光信号会一下子消失、如果把温度和荧光信号的变化做一个图，就会看到一开始，荧光信号没有变化，是一个平直的线。达到TM附近是，会有一个比较锐利的峰，说明信号的变化很大，继续加热超过TM，这是双链都打开了。所以信号也不会再有变化，所以又是平直的线。

如果产物都是特异性的，就是我上面说的那样。如果有非特异性产物，就会出现不在TM就出现峰值，或者有矮而胖的峰值等等异常情况出现，这样，那个管子的样本就不能用了。