Question

高中生物常用的实验方法有哪些?

Answer 1

1．实验方法
实验方法是整个实验设计的精髓,是做好实验设计的关键所在.现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：
(1)化学物质的检测方法：
①淀粉——碘液
②还原糖——斐林试剂、班氏试剂
③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂
④乳酸——pH试纸
⑤O2——余烬复燃
⑥无O2——火焰熄灭
⑦蛋白质——双缩脲试剂
⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液
⑨DNA——二苯胺试剂
⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
(2)实验结果的显示方法：
①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量
②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量
③原子途径——放射性同位素示踪法
④细胞液浓度大小——质壁分离
⑤细胞是否死亡——质壁分离
⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量,发育速度等
⑦生长激素作用——生长速度(体重变化,身高变化)
⑧胰岛素作用——动物活动状态
⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度
⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基
(3)实验条件的控制方法：
①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物
②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水
③除去容器中CO2——NaOH溶液
④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境
⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热
⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光
⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光
⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠
⑨线粒体提取——细胞匀浆离心
⑩骨的脱钙——盐酸溶液
⑾灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌,对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净,擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行.
(4)实验中控制温度的方法：
①还原糖鉴定：水浴煮沸加热
②酶促反应：水浴保温
③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热
④DNA的鉴定：水浴煮沸加热
⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养
2．斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在,在医学上用来检验糖尿病,其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化,但成分略有不同：
斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液.分为斐林试剂A和斐林试剂B,A为CuSO4溶液,B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液,使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂.
班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液,又叫本尼迪克特(Benedict)试剂,它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的,只是比斐林试剂更稳定,所以在临床化验中更常使用.
尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸,呈白色,带蓝色斑点,用于糖尿病患者的尿糖测试.每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫克,氢氧化钠235毫克.尿糖试纸法快速、方便,试纸的正确使用方法为：将试纸条放在尿液中浸湿,一秒钟后取出,在一分钟内观察试纸的颜色,并与标准色板对照,根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度.
3．斐林试剂和双缩脲试剂的比较
相同点：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；
②斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为0．1g/mLNaOH溶液.
不同点：①CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为0．05g/mLCuSO4溶液,
双缩脲试剂B为0．01g/mLCuSO4溶液.
②配制比例不一样.
③使用方法不一样：斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使用,
双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后,再加入试剂B.
④鉴定的对象不一样：斐林试剂鉴定的是还原糖,双缩脲试剂鉴定的是蛋白质.
⑤反应本质及颜色反应不一样.
4．苏丹Ⅲ染液与苏丹Ⅳ染液的比较
都是用来鉴定脂肪.苏丹Ⅳ染液更易溶于脂肪,所以染色更深,同时要求染色时间更短.
生物学中常用的试剂：
1、斐林试剂： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）.用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热或直接加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色.
2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀.用于尿糖的测定.
3、双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）.用法：向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀.如待测中存在蛋白质,则呈现紫色.
4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀.用于检测脂肪.可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）.
5、二苯胺：用于鉴定DNA.DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色.
6、甲基绿：用于鉴定DNA.DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色.（甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.）
7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中,用苏丹Ⅲ染液染色,再用50%的酒精溶液洗去浮色.
8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒,75%的酒精能渗入细胞内,使蛋白质凝固变性.低于这个浓度,酒精的渗透脱水作用减弱,杀菌力不强；而高于这个浓度,则会使细菌表面蛋白质迅速脱水,凝固成膜,妨碍酒精透入,削弱杀菌能力.75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等.
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA.
10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖.
11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色,可将染色体染成紫色,通常染色3~5分钟.（也可以用醋酸洋红染色）
12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率.（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）
13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验.
14、碘液：用于鉴定淀粉的存在.遇淀粉变蓝.
15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素.
16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油）可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.
17、二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分.
18、碳酸钙：研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏.
19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液,比植物细胞液的浓度大,可用于质壁分离实验.
20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合,防凝血.
21、氯化钠溶液：①可用于溶解DNA.当氯化钠浓度为2mol/L、 0.015mol/L时DNA的溶解度最高,在氯化钠浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最低.②浓度为0.9%时可作为生理盐水.