Question

大鼠的肺组织做western前怎么处理，谢谢！我的其中要检测的蛋白有磷酸化的，需要加磷酸酶抑制剂吗？

Answer 1

液氮冷冻 然后研磨成粉末 然后按细胞提取蛋白步骤处理即可 就是加裂解液 然后95°煮10分钟 再加Loading buffer
需要加磷酸化酶抑制剂

追问

能具体一些吗，我第一次裂解组织从未做过实验。希望您可以吧裂解液和组织的比例，还有磷酸酶抑制剂的用量，以及煮蛋白和buffer的比例告诉我，好吗，谢谢！

追答

没有称过组织多重哎 反正就是很小很小一块 最终大概弄成300ul的量 各加多少就得看你每个试剂是多少X的了

追问

如果是1g的组织，我应该用多少各种液体啊，谢谢！裂解组织需要加原凡酸钠吗？

追答

之前做没有称过 所以你就配成300ul最终就可以了 大概200ul的1X的裂解液，100ul 3X的loading buffer， 没加过那个如果你看什么文献上有加的也可以加吧

Answer 2

一抗一般稀释1000倍，二抗一般稀释2000-4000倍。 你自己可以试试，按照上面说的做，结果太亮就再多稀释些，太暗就少稀释些。