Question

在做western-blot时，昨天的样品和今天的一样为什么昨天有条带出现而今天的却没有啊我的实验步骤是一样

我的实验步骤是一样

Answer 1

我做western有时也是出现这样的情况，样品保存好，防止降解，封闭时间要合适，过长过短都会影响结果，不建议过夜封闭。一抗二抗浓度要合适。
另外，考虑下你昨天的条带是不是正确的带，如果昨天的条带没有说服力，那么今天不出现条带是正常的。

追问

谢谢 感谢你的回答，我也有些感觉我的条带不是目的条带

Answer 2

这是生物实验嘛 重复不出来是很正常的 再试试

追问

对不起，我把下个人的追问发给你了啊 重复时 什么需要注意的吗

追答

你做完把一抗放回-20了么。。。
既然实验步骤都是一样那什么电压大小 时间的肯定都没问题 在细节上多注意点 再试试呗

追问

好的，谢谢了 希望我能成功

Answer 3

marker看得见吗？是不是转膜时电源插反了，蛋白跑了啊?

追问

用的是预染的mark ,可以见到mark的条带，但是不多，不知为何

追答

问一下，样品一样，你的目的蛋白一样吗？是否更换了其他抗体？
如果没有，可能是转膜时间太久了吧？可以再做一次，如果还是这种情况，再检讨也不迟。

追问

我把胶染色了，分析稍微有些条带。估计是转上了。