Question

体内脱氧核糖核苷酸是如何生成的

Answer 1

脱氧核糖核苷酸是通过相应核糖核苷酸还原，以H取代其核糖分子中C2上的羟基而生成，而非从脱氧核糖从头合成。

脱氧核苷酸为白细胞、血小板、 T 淋巴细胞及 NK细胞的增殖提供脱氧核苷酸原料，刺激上述细胞的增殖及分化成熟，促进骨髓释放白细胞，提高白细胞水平，减少重度骨髓抑制发生率，提高免疫功能，减少感染的发生。

双脱氧核苷酸末端终止法：

只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长。反应结束时每管反应体系中便合成以共同引物为5′端，以双脱氧碱基为3'端的一系列长度不等的核酸片段。

经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离这些长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段3’端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。

Answer 2

脱氧核糖核苷酸的生成
DNA与RNA有两方面不同：(1)其核苷酸中戊糖为2脱氧核糖而非核糖。(2)含有胸腺嘧啶碱基，不含尿嘧啶碱基。

图1　大肠杆菌硫氧化还原
蛋白的320残基亚单位结构图
(一)脱氧核糖的生成：
脱氧核糖核苷酸是通过相应核糖核苷酸还原，以H取代其核糖分子中C2上的羟基而生成，而非从脱氧核糖从头合成。此还原作用是在二磷酸核苷酸(NDP)水平上进行的。(此处N代表A、G、U、C等碱基)。
催化脱氧核糖核苷酸生成的酶是核糖核苷酸还原酶(ribonudeotide reductase)。已发现有三种不同的核糖核苷酸还原酶，此反应过程较复杂。核糖核苷酸还原酶催化循环反应的最后一步是酶分子中的二硫键还原为具还原活性的巯基的酶再生过程。硫氧化还原蛋白(thioredoxin)是此酶的一种生理还原剂，由108个氨基酸组成，分子量约12kD。含有一对邻近的半胱氨酸残基(图1)。所含硫基在核糖核苷酸还原酶作用下氧化为二硫键，后者再在在硫氧化还原蛋白还原酶(thioredoxin reductase)催化，由NADPH供氢重新还原为还原型的硫氧化还原蛋白。因此，NADPH是NDP还原为dNDP的最终还原剂。(图2)
核糖核苷酸还原酶是一种变构酶，包括B1、B2两个亚基，只有B1与B2结合时。才具有酶活性。在DNA合成旺盛、分裂速度快的细胞中，核糖核苷酸还原酶系活性较强。