Question

蛋白质在细胞中的定位

请教一下：怎样定位细胞中的蛋白质位置或亚细胞结构位置？我现在知道有3种方法：1、免疫结合法2、同位素跟踪法3、探针法（这个方法不知道正确否）。请各位前辈指教。（这是我考研学校真题的一到大题，所以我很想知道答案。）

Answer 1

免疫组织化学、免疫荧光可以达到目的了。免疫组化可以看出蛋白在细胞核、细胞浆或细胞间质。如果要定位到比较大细胞器可能需要免疫荧光，用特异蛋白抗体和细胞器抗体共染；在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的。不知道你的探针法是什么探针，如果是RNA探针，达不到定位的效果，因为检测mRNA都是胞浆中。

Answer 2

1.一般，可以用免疫荧光。
2.另外，可以把蛋白标上GFP荧光，然后质粒转到细胞里，看它的分布位置。想确定细胞器定位的话，还得用细胞器特异性蛋白的抗体，同时标记。如果位置一样的话，就能确定目的蛋白是定位在某个细胞器了。
不过这种转入质粒的方法，因为大量表达了蛋白，可能会影响到该蛋白在细胞内的真实定位。还是第一种方法比较接近实际状况。