Question

高效液相做含测，保留时间差别大

这个物质不会随流动相的ph变化很大的，而且流动相ph我调得蛮准的，怎么两天做出来的保留时间差很多啊，会不会是柱子的原因啊？

Answer 1

是不是同一个样品不同时间做出来的保留时间差别较大？
保留时间影响因素比较多，如果已经确定pH值影响不大，可以从以下几个方面进行考虑：
1.流动相的比例，最好保证有机相的比例一致，保存及超声脱气的时候用封口膜封一下，减少有机相挥发，也不要放置太长时间
2.柱温是否恒定，柱温在一定程度上会影响保留值，最好设为定值，不要设为不控制
3.色谱柱有没有更换，不同厂家的同一类型色谱柱由于填充技术、制备工艺的不同，在同样色谱条件下对同一组分的保留情况会有所不同，即使是同一厂家的也会有这种情况
4.液相系统是否更换，不同的色谱仪的管路长短不同，会使走样时柱压不同，柱压也会影响出峰时间和峰形，原理类似于加压过柱
5.如果是梯度洗脱，要保证平衡时间足够长，否则也会引起保留值改变

Answer 2

标准品与样品的保留时间差吗？
决定保留时间的因素有很多 温度 流相得比例 不同厂家的试剂