植物多糖的最佳提取方法是什么?
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植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO<2>超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.
举例: 蒽酮比色法,具体步骤
一、仪器、试剂和材料
1.仪器:电子天平,超声波清洗器,电热恒温水浴锅,抽滤设备,分光光度计,容量瓶,刻度吸管等
2.试剂:
(1)葡萄糖标准液:l00 µg/mL
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。
3.材料:甜高粱,甘草
二.操作步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准液(mL)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水(mL)
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量(µg)
0
10
20
30
40
60
80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴沸腾起计时,准确煮沸l0 min,取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(µg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取:将样品粉碎,105 ºC烘干至恒重,精确称取1~5 g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加盖,超声提取10 min,冷却后过滤(抽滤),残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤(抽滤),滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。
3.稀释:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。
4.测定:吸取1 mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0 mL蒽酮试剂,平行三份;空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(µg)。
三、结果处理:
C × V总 × D
样品含糖量(%)= ————————————— × 100%
W × V测 × 106
其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(µg),
V总——提取液总体积(mL),
V测——测定时取用体积(mL),
D——稀释倍数,
W——样品重量(g),
106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
举例: 蒽酮比色法,具体步骤
一、仪器、试剂和材料
1.仪器:电子天平,超声波清洗器,电热恒温水浴锅,抽滤设备,分光光度计,容量瓶,刻度吸管等
2.试剂:
(1)葡萄糖标准液:l00 µg/mL
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。
3.材料:甜高粱,甘草
二.操作步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准液(mL)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水(mL)
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量(µg)
0
10
20
30
40
60
80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴沸腾起计时,准确煮沸l0 min,取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(µg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取:将样品粉碎,105 ºC烘干至恒重,精确称取1~5 g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加盖,超声提取10 min,冷却后过滤(抽滤),残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤(抽滤),滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。
3.稀释:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。
4.测定:吸取1 mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0 mL蒽酮试剂,平行三份;空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(µg)。
三、结果处理:
C × V总 × D
样品含糖量(%)= ————————————— × 100%
W × V测 × 106
其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(µg),
V总——提取液总体积(mL),
V测——测定时取用体积(mL),
D——稀释倍数,
W——样品重量(g),
106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
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