Question

新一代测序原理及意义是什么

怎样理解高通量及操作简单

Answer 1

新一代（第二代）测序技术的测序原理是“边合成边测序”。

先把基因组打断成100kb左右的小片段，每个片段单独测序，测完以后依靠大型计算机进行拼接，所以新一代测序仪测序简单，难在拼接。

测序时，以待测DNA片段为模板，进行互补链的合成，每延伸一个碱基就进行一次激光扫描，读出是哪种碱基（四种碱基事先进行不同标记，在激光下呈现不同颜色），很方便地就完成了测序。

高通量体现在一次上机能测的样本数，第一代测序仪一次上机仅能测96个样本，第二代测序仪一次上机能测数万个样本。
操作简单体现在机器自动化。

新一代测序的意义，是实现了高通量、低成本、快速、操作简便，为开展大规模物种测序及人类基因组研究提供了可能。

追问

难怎样准确的拼接？样本量不太大（<15）的时候跟一代测序优缺点在哪？

追答

难以拼接是因为样本打断得太小了。像人类基因组大小是3G，打断成100kb，相当于是打成了3万个片段，用3万个片段去拼出一个完整的人类基因组，计算量及复杂程度可想而知。

样本量很小的时候二代测序没有任何优势，反而会成本很高。

二代测序的最突出优势就是高通量，只有很多样本批量上机时，成本才能降下来。一代测序就显得很灵活，样本量多少不会牵涉到成本。