Question

为什么提取dna紫外光谱鉴定时A260/A280大于2

最后RNA酶的加入是老师负责完成的。我知道是因为有RNA污染，但是我看了所有人的数据，凡是DNA浓度大于1000的，A260/A280全部大于或等于2，是不是和RNA酶不足量有关？

Answer 1

作为一个成熟的学生实验，各种试剂的量应该都是足够的，最可能的原因是操作不熟练，导致DNA断裂、降解较多，小片段及单链DNA的增色效应导致吸光度增加.水浴消化温度、时间等也可能造成影响。

这种实验有些降解无法避免，没关系。初次做一个实验，花费时间比正常情况多一倍的也很常见。如果想确定降解程度，可以跑个电泳看看。

1、提取RNA测浓度时A260/A280，大于3的原因可能是降解。

2、一般对于DNA，纯净的时候比值是1.8，而对于RNA则是接近2.0。如果超过这个值，那么最有可能的就是核酸降解了，因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大，所以会使比值上升。

扩展资料：

紫外可见吸收光谱的基本原理是利用在光的照射下待测样品内部的电子跃迁，电子跃迁类型有：

（1）σ→σ* 跃迁 指处于成键轨道上的σ电子吸收光子后被激发跃迁到σ*反键轨道

（2）n→σ* 跃迁 指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向σ*反键轨道的跃迁

（3）π→π* 跃迁 指不饱和键中的π电子吸收光波能量后跃迁到π*反键轨道。

（4）n→π* 跃迁 指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向π*反键轨道的跃迁。

参考资料来源：百度百科-紫外可见吸收光谱法

Answer 2

作为一个成熟的学生实验，各种试剂的量应该都是足够的。最可能的原因是操作不熟练，导致DNA断裂、降解较多，小片段及单链DNA的增色效应导致吸光度增加。水浴消化温度、时间等也可能造成影响。

追问

可是我们所有浓度大于1000的人，RNA都没弄干净不会这么巧吧？比如我2800ng/ml，那个值是2.11~

追答

这种实验有些降解无法避免，也没太大关系。初次做一个实验，花费时间比正常情况多一倍的也很常见。如果想确定降解程度，可以跑个电泳看看。

Answer 3

不会，这个是比较纯净的了，A260/A230显示的是核酸比例，A260/A280显示核酸和蛋白比例，后者大于或者等于2表示蛋白量很少。一般来说，环境中存在RNA酶对RNA进行降解，所以说一般所需要加的RNA酶是比较微量的，不用考虑RNA酶含量

追问

那就是我们浓度大于1000的人实验操作有问题咯？