Question

用传统方法提取土壤基因组DNA，为什么就提不出来呢？

Answer 1

不知道你所说的传统方法是指什么。微生物与土壤混杂在一起，杂质很多，DNA就那么点，确实很容易提取失败。

建议在破碎细胞前先将土壤悬液充分摇匀，让微生物尽可能多的进入到悬液中，然后充分过滤，将土壤中较大的杂质过滤掉。
由于土壤中DNA量相对较少，所以细胞破碎步骤也很重要，本来就那么点DNA，如果细胞破碎不完全，又会损失掉一部分。
提取DNA时，如果传统方法不行，可以考虑用专门的土壤DNA试剂盒提取。

追问

SDS碱抽提法。过滤的话会不会把仅有的少量的DNA也过滤掉一些呢？

追答

过滤必定会有一些损失，但不过滤杂质太多，更不好提取，损失会更多。
过滤前先充分摇匀的话，还是能保证悬液中的微生物数量的。

追问

那用什么过滤好呢，就直接用膜还是？

追答

可以用灭菌过的纱布、铁纱，我做过半年的土壤和其它环境基因组的提取，采用过这种过滤的方式，我感觉还是可行的。

追问

恩。好的，谢谢！还有我们用的试剂盒能将一些样品中得基因提取出来，但另外一些就不行了呢？

追答

不同样本性质不同，这也正常。
比方说样本时间放久了，DNA会降解；或者土壤土质不同，微生物含量有多又少，等等。

追问

恩，好的.那我就先试试.谢谢！

追答

不谢！祝你实验顺利！

Answer 2

我最近也在 提这个，做了将近有两个月，结果PCR就是跑不出带，最后分析可能是土壤中含有腐殖质，于是我用70%的乙醇洗了一下，13000rpm离心5min,重复两次，最后100%乙醇洗一次，13000rpm离心5min，结果跑出带来了。你参谋参谋，做个小实验，看看行不行。

Answer 3

土壤基因组不好提