Question

DNA限制酶切和琼脂糖凝胶电泳中常说的Marker是什么？还有Loading Dye 在实验中起到什么作用？

Answer 1

DNA的限制性酶切
限制性内切酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此处切割双链DNA。

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 　　loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。

loading dye 是跑琼脂糖凝胶用来染DNA的染料,它是和loading buffer按一定的比例混合而成的.有的进口试剂buffer里已经加了loading dye的,就不用加了.试剂说明书都有说明的.

.琼脂糖凝胶电泳marker是用来做参考的，类似于标尺的作用。
marker会跑出很多条带，对应带的片段长度是一定的（不

Answer 2

1. 没紫外线，确定电源完好？灯管都是好的？ 2. 你的样本加了荧光染料没有？比如溴乙锭，或者SYBR Green。 你没有染色吧……

Answer 3

1. marker是分子量标准 你要知道电泳时 分子量越小的跑得越快 这样的你的酶切产物电泳后形成的条带 就可以对照marker知道是多大分子量的了
2. loading dye 一般用溴酚蓝或二甲苯青 和混在上样缓冲液里 和 样品一起点到点样孔中，电泳过程中 dye也会往前移动。在特定浓度的凝胶里 dye的迁移率会和特定的分子量dna速度一样。目的是为了知道电泳跑到什么时候可以停止，起指示作用的。 否则一大块胶 没有指示dye，你也不知道改跑到什么时候 还得跑跑就得紫外照照

追问

我们试验中点样时有四种：λDNA/HindIII λDNA 酶切产物 自制DNA 那么λDNA/HindIII 就是MARKER么

追答

λDNA/HindIII 是marker
并且早已经商品化了
http://www.takara.com.cn/?action=Page&Plat=pdetail&newsid=192&subclass=1

追问

那其余几种都是干什么用的 起什么作用 麻烦你了

追答

你的样品吧 具体你应该比我清楚哦