Question

SSR 分子标记技术的实验过程

Answer 1

1）找个公司合成引物
2）提取DNA
3）PCR扩增
4）电泳检测，不要用琼脂糖，要用丙烯酰胺凝胶，变性非变性均可，大板小板都行，但大板效果更好点，小板做起来比大板省点事。
5）显影，一般用银染，NaON和碳酸钠均可。
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下面给你粘一点我论文里的步骤：

1.2. SSR引物
本研究SSR位点及其引物序列来自2011年发布的烟草高密度SSR遗传连锁图谱，在图谱中24个连锁群上按照间隔3~5cM的距离选取了位点并合成引物，共合成SSR引物697对，用于CMV标记筛选和遗传定位。
1.3. DNA提取
采用天根™ DNA提取试剂盒提取供试材料全基因组DNA。
1.4. PCR反应体系
PCR总反应体系为10µL，其中30~50 ng/µL DNA 模板1 µL，2×Mix 5µL，2µmol/L正反向引物混合工作液1µL，加ddH2O至10µL。所用试剂购自MBI。
PCR反应在96孔ABI Veriti梯度基因扩增仪上按以下程序运行：首先94°C预变性5min； 94°C 15s，55°C 15s，72°C 30s 32个循环；最后72°C延伸7min，4°C保存。
1.5. 电泳检测
完成PCR循环48h内，取2µL PCR产物在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上恒电压850v电泳90min。用稍加改进的NaOH银染方法对电泳后的聚丙烯酰胺凝胶进行染色显影。各种溶剂的配方和体积为：银染液，0.1%AgNO3溶液1L；显影液，16g NaOH，8mL 37%甲醛，加去离子水定容到1L；终止液，0.75%Na2CO3溶液1L。银染程序为：（1）去离子水冲洗15s；（2）银染8min；（3）去离子水冲洗15s；（4）在显影液中轻摇至显带；（5）放入终止液，终止显影。显影完成之后，将聚丙烯酰胺凝胶放置在阴凉通风处3~4h，待完全干燥后，在透射式看片机上用数码相机采集图像。