Question

某一蛋白经SDS-PAGE

某一蛋白经SDS-PAGE后在标准蛋白的13000～36000D间出现了一条带，加入巯基乙醇和碘乙酸处理后，发现SDS-PAGE后仍然为一条带，且带的位置在13100D处，试推断一下该蛋白的可能结构。（碘乙酸可以结合在巯基上）

Answer 1

这个蛋白是由一条单独肽链所构成的，分子量大小为13100D，其中内部含有至少一对半胱氨酸。原因是未经过强还原剂处理的蛋白二硫键不能打开，在SDS-PAGE中存在空间结构使迁移率降低，这样分子量就比13000D要大。经过强还原剂（巯基乙醇等）处理后，二硫键打开后还只有一条带，证明这个蛋白是一条单独的肽链，如果是多条肽链的话二硫键打开后就应该是两条以上的带。打开二硫键的肽链在SDS-PAGE中不会受到空间结构的影响，所以能够正确的反应分子量，所以该蛋白的分子量应为13000D。在蛋白质中，二硫键的形成只会在两个半胱氨酸之间，所以这个蛋白至少含有一对半胱氨酸。

Answer 2

巯基乙醇作用：一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。及有可能该蛋白质含有S-S，在巯基乙醇作用下还原为SH-。断开二硫。
碘乙酸：是蛋白水解酶抑制剂在蛋白质提取过程中防止蛋白质被水解。碘乙酸可以结合在巯基上。阻止蛋白质SH-重新变成S-S。

他俩的作用加一起就是把蛋白质的S-S全部断开，而且不让它复原。
巯基乙醇和碘乙酸处理后，带的位置在13100D处，原位置在13000～36000D间。差不多是26000.正好是13100的二倍。
蛋白由两条的多肽链通过链间二硫键交联而成，每条多肽链的相对分子质量在13100处。