Question

用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作？

提取质粒操作过程：这个是那生产的试剂盒？
1将1～1.5ml过夜培养的细菌液加入1.5ml离心管中。
2于10,000rpm(8,000～10,000×g)离心30s,并弃去上清液。如有需要，可多次重复步骤1、2，以收集更多细菌菌体，但勿过量，以免影响提取质粒的质量。
3加250μl Resuspension Buffer，重悬细菌体沉淀，重悬后应该没有细菌团块。
4加250μl 细胞Lysis buffer，轻柔颠倒4～6次。不要剧烈振动，以防止基因组DNA被剪切。注意不要让反应持续超过5min,
5加350μl Neutralization buffer，立即轻柔颠倒离心管4～6次。溶液应该出现絮状物，但不会出现局部沉淀。
6于13,000rpm(＞14,000×g）离心10min。如离心机转速不够可延长离心时间，直至形成紧密的白色沉淀。
7将步骤6离心后得到的上清液转移到Spin column内，于6,000rpm(≤6,000×g）离心1min,并弃去接液管内液体。
8向Spin column内加650μl Wash Buffer，于12,000g离心30～60s,并弃去接液管内液体。
9重复第8步一次。
10再次于12,000g离心1min，然后将Spin column转移到无菌的1.5ml离心管中。如不进行该步离心，则无法保证离心柱内残液被彻底清除。
11向Spin column内加50μl Elution buffer、去离子水或TE溶液，并于室温静置1min。可根据实验的实际需要决定洗脱液用量。
12于12,000g离心1min，1.5ml离心管内溶液中含有质粒DNA。

Answer 1

各公司的质粒提取试剂盒大同小异，你这个说明书可能是宝生物的试剂盒。
用试剂盒提，准备工作都比较简单：
1，摇菌；
2，准备ddH2O，无菌枪头和离心管；
3，检查溶液1是否加了Rnase，以及wash buffer是否加了无水乙醇；
3，现在天气冷，检查buffer是否有沉淀，有sds的buffer可能有会有析出，提前开水浴锅，温浴，此外，最后一步加TE或水洗脱质粒时，为提高收获量，在离心前，将柱子在50℃水浴2min更好。
若有疑问，欢迎继续讨论，纯属手打，欢迎采纳，祝实验顺利！

Answer 2

确认 Resuspension Buffer中是否加入 Rnase，Lysis buffer，观察其他各buffer是否有沉淀析出，有的话需要在37℃中化开或者换新的试剂盒。 一般Wash Buffer是需要加入无水乙醇的
Elution buffer应该提前在65℃水浴锅中预热。

Answer 3

磁珠法提取DNA试剂盒实验前准备工作：一、使用前、请提前1小时将试剂盒放置室温、让其恢复到室温。二、检验BufferB是否有沉淀、如果有可温浴重新溶解。
河南惠尔纳米科技生物 DNA实验室：任老师