Question

DNA琼脂糖凝胶电泳条带纵列怎么有那么多……跪求解答

加入的DNA样品是几个片段？最后纵列电泳出来的一串同长度的不同位置的条带代表什么？我不是说横排对比的那些多个样品的条带，是注入的一个样品后跑出来的那一串。。。难道是一个样品有一堆片段么····还是同一个片段？……就比如说这张图从上往下看的其中一列····
图片

Answer 1

你这张图片是测序的原理图。至于你所看到的DNA琼脂糖凝胶电泳条带纵列多，很可能是marker的条带。PCR扩增后条带也不一定是单一的，非特异就不用说了。反应体系中混入了杂质，引物形成了二聚体，模板量加入过多，都可能会多形成几条条带。

Answer 2

你跑的是PCR扩增后的电泳鉴定吗？如果是的，那么要看你扩增所用的引物是否为特异性的，如果是特异性的引物，那么理论上应该是一条主带；如果是兼并引物或者是随机引物，那么有可能扩增到无数条带（原因是引物特异性不强，可以在很多序列位置上结合扩增）。

追问

那个····我是从生物书上看的···之前生物课有做过PCR扩增之后的电泳····然后我不明白那个竖的一串的片段代表什么，只知道横着的可以用来比较·····扩增后不应该所有的DNA都一样么·····

追答

你给的图片可能是测序反应（Sanger双脱氧链终止法）原理图，下面是两个基本概念，你可以看一下：
Sanger法测序的原理
　　就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

测序方法
　　生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 　　
由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因些上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 　　
在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下，对各组寡核苷酸进行电泳分析，只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道上，即可从凝胶的放射自影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。

Answer 3

你直接从下往上读就行了，记得再翻成5‘到3’的

Answer 4

这个电泳图看着像DNA测序的原理图，不是一般的PCR琼脂糖凝胶电泳。

追问

请问···DNA测序为什么会有这么多条带·····但是课上电泳也是竖着一大串·····然后我就找了张很像的图

追答

琼脂糖电泳就像是一个网格状的筛子，不同大小、不同构像的DNA电泳在胶里的速度会不同，这样就可以把不同的DNA片段分离出来。所以说，竖着的一大串可能是碱基数不同的DNA，也可能是构像不同的DNA（例如同一个质粒，电泳后，会有三条不同的条带）