猪水泡病的疾病病原
猪水泡病的病原是猪水泡病病毒(SVDV)。根据国际病毒分类委员会(ICTV)第十五次报告(1991),SVDV归为小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)。鉴于SVDV与人类柯萨奇病毒(Human Coxsackievirus)B5型有非常相近的理化特性、生物学特性及血清学关系,分类报告未将SVDV单独列为肠道病毒属的一个成员,而是将其归为柯萨奇B型病毒之列。
SVDV无囊膜、不含脂类和碳水化合物。病毒的基本结构为单纯的结构蛋白包含着一个RNA及一个与RNA共价联接的小蛋白3B(VPg)。病毒粒子呈二十面体对称。电镜下呈球形,直径约280A,在CsCl中的浮密度为1.43g/cm。沉降系数为150s。在感染细胞内常可见病毒呈晶格排列和环形串珠状排列。与口蹄疫病毒(FMDV)、水泡疹病毒(VESV)和水泡性口炎病毒(VSV)的理化特性及生物学特性对比见表5-11。
猪水泡病病毒与其他相关病毒基本特性对比
项 目猪水泡病病毒口蹄疫病毒水泡性口炎病毒水泡疹病毒
(SVDV)(FMDV)(VSV)(VESV)
分 类小RNA病毒科小RNA病毒科弹状病毒科嵌杯样病毒科
肠道病毒属口蹄疫病毒属水泡病毒属嵌杯样病毒属
核酸型单股正链RNA单股正链RNA单股负链RNA单股正链RNA
核酸感染性++-+
形态球形球形棒形 球形
对称型 20面体 20面体螺旋 20面体
大小 22-30nm22-30nm 170nm×70nm35-39nm
囊膜- -+-
抗酸性(pH5)+ -++/-
抗醚++-+
1mol/L MgCl2 +-?-
中对50℃耐受性
浮力密度(CsCl)1.34g/cm1.34g/cm1.19g/cm1.33-1.39g/cm
沉降系数150s140s625s170-183s
致乳牛鼠发病+++-
易感动物 猪偶蹄动物猪、牛、马猪
易感细胞 猪肾犊牛甲状腺、猪肾、牛肾、猪肾
鼠肾、猪肾Vero、鼠肾
每个SVDV粒子的衣壳由各60个拷贝的四种结构蛋白构成,即1A(VP4,含39个氨基酸)、1B(VP2,含261个氨基酸)、1C(VP3,含238个氨基酸)和1D(VP1,含283个氨基酸)。1A为内壳蛋白,靠近病毒核酸,1B、1C和1D为外壳蛋白。对病毒空壳,1A和1B则以前体蛋白形式存在,即1AB(VPO),故聚丙烯酰胺凝胶电泳分析时只能出现三个蛋白带。TSUDA,T.等(1987)认为1B和1D是诱导中和抗体产生的主要抗原蛋白,而薛景山等(1993)则认为是1C和1D。还不清楚准确的中和性抗原位点的氨基酸组成。Seechurn,P.(1990)对致病性与非致病性的SVDV进行的核酸全序列分析奠定了这一项工作的研究基础。
SVDV中心为一条感染性的单股正链RNA,长度约为7.4kb,其3’端含polyA,5’端非编码区与3B共价联接。该RNA本身兼有mRNA功能。
病毒RNA的复制是通过二种复制中间体在细胞浆内进行的。即分别以正链RNA和负链RNA作为模版进行复制。病毒RNA首先复制负链RNA,再由负链RNA复制正链RNA,由正链RNA翻译病毒蛋白,并参与组装病毒粒子。病毒正链RNA编码着一条大的聚合蛋白,它是翻译后被切割成各个功能蛋白的。结构蛋白和正链RNA及与之共价联接的3B一起组装成完整病毒粒子。病毒在猪肾细胞系上的复制周期为3-4小时。
SVDV具有良好的免疫原性,并且相当稳定。SVD灭活疫苗具有可靠的免疫效力。中和试验、琼脂免疫扩散试验及补体结合试验都证实了不同病毒分离株存在着抗原差异,但差异并不大。不同病毒株的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,结构蛋白之间的差异比较显著。据报道SVDV在细胞上传40代即可发生变异。不同毒株核酸全序列的分析比较也证实SVDV和其他小RNA病毒一样存在着毒株间的差异。不同毒株的致病力及诱导中和抗体的能力也表现不同,但是不同SVDV毒株间在猪体上能交叉保护,还没有发现SVDV有亚型分类的报道。尽管SVD与FMD、VS和VES有相似的临诊症状,但其病原之间理化特性及生物学特性相差甚远(见表5-11)。SVDV与FMDV分类地位相近,但病毒多肽之间没有任何血清学关系。SVDV与人类柯萨奇B5型病毒(CB5)具有非常相近的理化特性和生物学特性,并且其抗血清可以交互中和这二种病毒。CB5可以感染猪,但无临诊症状。尽管排泻物中可以分离出病毒,但不发生病毒血症。可能发生与SVD类似的脑损伤,但较轻微。猪感染CB5后可产生中和SVDV的血清抗体,但用SVDV攻击后仍可发病。一般可以显示出一定的保护率。从SVDV与人类柯萨奇B型病毒(CB1、CB3、CB4、CB5)在四个结构蛋白上的氨基酸序列比较上看,二者存在广泛的同源性,同源性甚至高于人类柯萨奇病毒B亚型之间的同源性。大多数学者认为SVDV是CB5的变异株。Metzger,A.A.(1989)甚至把SVDV称作猪的柯萨奇病毒。最新的病毒分类报告也将SVDV归为CB病毒之列。
能够自然感染SVDV的只有猪(包括野猪)和人类。人类受感染后出现类似人类柯萨奇病毒感染的症状。但人类出现临诊症状的很少见。新生小鼠可通过脑内、腹腔内或皮下接种而感染死亡,而7日龄以上的小鼠则有抗性。实验室内一般通过IB-Rs-2细胞系及新生乳鼠(1-2日龄)来进行检疫工作和繁殖SVDV。在乳鼠体内以肌肉骨胳系统含毒量最高,其次是脑、肝、脾和肠。
SVDV具有抗酸和乙醚的特点。在有1mol/L MgCl2存在的条件下可耐受50℃。SVDV在各种环境条件下都相当稳定。生猪肉及其制品(香肠等)都会长期携带活病毒,带毒时间取决于周围的环境条件。猪尸体可带感染性活毒达11个月以上。从埋葬感染猪死尸周围的土质中的蚯蚓肠管中仍可分离到SVD活病毒。猪肉产品经69℃15分钟方可杀灭SVDV。
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本病毒能在仔猪肾原代细胞和猪肾传代细胞(BK15)上生长,产生细胞病变。在猪肾细胞中复制,接毒6h可见细胞病变,7h后在细胞质中形成晶状排列。将病毒接种2~3日龄乳鼠或1~2日龄乳仓鼠能感染发病。病毒主要存在于病猪的水疱液、水疱皮及淋巴中,血液、肌肉、内脏、皮、粪便等也含有一定量病毒。本病毒对外界环境的抵抗力较强。在冷冻条件下存活时间较长,普通冰箱中存活74天,-20℃保存的水疱皮中的病毒可存活540天,-30℃时可存活两年半。病毒抗热性也较强,加热50℃30min不失感染力,60℃30min和80℃1min才能杀死。屠宰猪在65~67℃经3~5min烫毛后,取水疱皮磨碎接种健康猪,还能使半数猪只发病。病毒在被粪污染的猪舍中存活8周以上;病猪肉腌制后3个月及病猪粪于12~17℃储存138天仍可分离到病毒。在pH2~12之间不能使病毒灭活。
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