Question

构建质粒载体时需考虑哪些特性

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Answer 1

　　用作克隆载体的理想质粒一般具备下述特点：
　　①具有松驰型复制子（如ColE1），复制子（replicon）是质粒自我增殖所必不可少的基本条件，并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。
　　②在复制子外存在几个单一的酶切位点（或多克隆位点），以便目的DNA片段插入。
　　③具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志，如氨苄青霉素抗性基因（Ampr）和四环素抗性基因（Tetr）等，以便从平板中直接筛选阳性重组子。
　　④分子量相对较小和较高的拷贝数。此外，质粒的缺点是容量较小，一般只能接受小于15kb的外来DNA，插入片段过大会导致重组子扩增速度减慢，甚至使插入片段失活。主要是对目的基因克隆，建立DNA文库和cDNA文库，其上有复制子即可。