Question

关于基因工程的一道题。

图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点， ampR为青霉素抗性基因，tctR 为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

据图回答：

（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、

三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。

（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；花接种到含青霉素培养基中，能生长的原核宿主细胞所含的连接产物是 ；

（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 ；

（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。

我只想知道第4题是如何做的。答案是
EcoRI和BamHI。 我有个疑惑是如果用两种酶来切目的基因的话不会导致产生两种目的基因吗？

Answer 1

你的疑惑是对的，也是可以理解的。个人认为出题者的意思是目的基因两端有这两种酶切位点，且这些酶切位点可以分开。比如E1-----------B1-E1, E1--B1------------E1, E1-B1-----------E1-B1, B1--E1------------B1-E1.理想情况下，双酶切只产生一种基因。但是如果酶切位点重叠或紧邻，则会如你所担忧酶切不彻底，产生复杂多种产物。
个人认为出题者的意思是目的基因两端有这两种酶切位点，且这些酶切位点可以完全分开。但出题人没有你考虑全面，或者缺乏实际工作经验。因为在实际工作中，你担忧的问题常常出现，并影响工作效率。你比出题人强。青出于蓝而胜于蓝！

Answer 2

选择题：人们常选用的基因工程运载工具细菌质粒分子往往带有抗生素抗性基因，1.有些目的基因并不是直接表达在生物体的性状上的，所以不一定能看到目的