Question

几道生物题，谢啦~

1 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？
2 β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白，应如何设计？
3 在基因工程中的第四步中涉及目的基因的检测与鉴定，其中所用到的DNA分子杂交技术的原理是什么？为什么如果将探针与含目的基因的基因组杂交会显示出杂交带？

Answer 1

1》不可以，大肠杆菌是原核生物,只含核糖体,只能合成蛋白质,不能对蛋白质进行加工,生产糖蛋白,需要糖基化过程人的糖蛋白需人工糖基化,才具生物活性,所以,单用大肠杆菌不行
2》
1、提取β-珠蛋白的mRNA
2、逆转录mRNA合成互补DNA，再进行DNA克隆
3、将目的DNA连接到载体（质粒）中，在转移到大肠杆菌细胞中
4、删选出含有目的基因的菌落
5、扩大培养大肠杆菌，表达目的β-珠蛋白
3》碱基互补配对原理；含有目的基因的DNA片断上有放射性同位素标记，如果杂交成功，可以检测到

追问

这个我也想到过，但是探针与含目的基因的基因组是独立完整的啊，他们如何进行碱基互补配对？

追答

基因探针是会携带一些引物和内切酶的，通过破坏目的区域的基因，再用探针的基因去补全。简单滴说就是先破坏，再补上，但是补上的材料是做了记号的。

Answer 2

1不能啊，因为糖蛋白是需要加工的，在原核生物体内无法调控真核细胞基因的
2这个，我觉得前面的话都没有用，基因工程的方法啊，可以从DNA文库里面提取β-珠蛋白的mRNA然后反转录成可以有原核生物直接使用DNA，再用基因工程技术，把目的基因导入工程菌细胞中
3DNA分子杂交技术原理是碱基互补配对原则，因为严格碱基互补配对原则，所以探针会与含目的基因的片段进行杂交从而显示出杂交带。

Answer 3

1.不能。大肠杆菌是原核细菌，没有高尔基体，糖蛋白前体需要在高尔基体中修饰后才能带上糖链。
2.将鼠的β-珠蛋白基因经修饰后转移到大肠杆菌中。
3.碱基互补配对原则，即A-T,G-C；探针与目的基因互补配对而结合，经分离后，未结合探针被洗脱，结合探针由某种方式显色。

Answer 4

1.大肠杆菌生产出的是胰岛素原，要经过后期加工把胰岛素原的C肽切除，生产糖蛋白可生产出蛋白质后再糖基化
2.同上
3.碱基互补配对，用的是Southern印迹法，探针事先是用同位素标记过的，用硝酸纤维膜作DNA凝胶电泳，再用探针直接与膜上的样品之间杂交，再通过放射性自显影技术对结果检测，就可确定是否含有某一特定gene

追问

好难懂啊，涉及到好多不懂的知识。看来下次提问要注明我的高二水平。。。